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EMSA組學技術服務

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EMSA組學技術服務

凝膠遷移或電泳遷移率檢測是一種檢測蛋白質和DNA序列相結合的技術,初用于研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用,可用于定性和定量分析。分為2種類型:同位素標記探針,非同位素標記探針。

通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復合物和非結合的探針。DNA-復合物或RNA-復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉錄調控因子一類的DNA結合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細胞抽提液。在檢測RNA結合蛋白時,依據目的RNA結合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質細胞抽提液。競爭實驗中采用含蛋白結合序列的DNA或RNA和寡核苷酸序列(特異),和其它非相關的序列(非特異),來確定DNA或RNA結合蛋白的特異性。在競爭的特異和非特異序列的存在下,依據復合物的特點和強度來確定特異結合。

EMSA組學技術服務步驟:探針的標記,探針的純化,EMSA膠的配制,EMSA的結合反應,探針冷競爭反應,突變探針冷競爭,super-shift 反應,電泳。

內容:包含電子版掃膜結果及灰度值分析,每張膜可做1-7個樣本。

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